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磁珠常見問題及對策

發布時間: 2020-07-31  點擊次數: 1067次

1:如何提高抗體與磁珠結合效率?

磁珠與抗體的結合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關,請確認抗體的類型與 Protein A配基的親和效率。如抗體所屬亞型與Protein A的親和度較低,可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間(30~120min)、提高結合緩沖液的pH值(8~9)及降低離子強度(25~100mM NaCl)等方法提高親和效率。

2:如何提高磁珠在免疫沉淀反應中的特異性?

可以先將抗體與樣品進行孵育,形成抗體-抗原復合物,再用Protein A磁珠捕獲復合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結合效率,并降低磁珠與樣品接觸的時間,從而提高沉淀產物的特異性。對于蛋白質/核酸共沉淀或染色質免疫共沉淀也推薦使用此法。

3: 如何避免磁珠在儲存或使用過程中可能出現的聚集情況?

磁珠應保存在2~8℃,使用時應避免由于污染而導致的不可逆聚集,或因干燥而導致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發生聚集屬于正?,F象,不影響磁珠的正常使用。在Binding buffer和Elution buffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、Tween-20或Triton X-100)可有效防止磁珠聚集。經過低pH洗脫操 作的磁珠可以用結合緩沖液洗滌至中性,然后用含有0.1%(v/v)Tween-20的Tris buffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠,并用超聲波水浴處理2min,即可使磁珠恢復均勻狀態,以上處理均不影響磁珠的抗體 結合效率。

4: 如何解決磁珠易粘附管壁的現象?

建議使用低吸附率的耗材進行磁珠操作。另外,在緩沖液中添加 0.01%~0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、Tween-20或TritonX-100)可以有效降低磁珠對耗材的粘附。

5: 磁珠在使用過程中出現結塊現象?

磁珠在使用時如果出現結塊現象一般較難振蕩打散,容易導致分布不均,出現該問題的原因是磁珠在磁場中放置太久而使磁珠牢固的結合在一起。用超聲波水浴處理 2min 即可打散磁珠使其重新分散, 但應注意超聲處理也會使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落,所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。

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