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C43(DE3)化轉表達感受態

C43(DE3)化轉表達感受態

簡要描述:C43(DE3)化轉表達感受態 DH10B 電擊感受態細胞只能用于電擊轉化,不能用于熱激轉化。DH10B 菌株來源于 MC1061 菌株,
mcrA、mcrBC 及 mrr 突變使 DH10B 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA (無論真
核生物還是原核生物的基因組 DNA 都能被高效的轉入 DH10B 中)。

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所屬分類:酶

更新日期:2020-10-12

廠商性質:經銷商

詳情介紹
品牌自營品牌供貨周期現貨
應用領域生物產業

C43(DE3)化轉表達感受態

產品簡介 DH10B 電擊感受態細胞只能用于電擊轉化,不能用于熱激轉化。DH10B 菌株來源于 MC1061 菌株, mcrA、mcrBC mrr 突變使 DH10B 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA (無論真 核生物還是原核生物的基因組 DNA 都能被高效的轉入 DH10B )。recA1 endA1 的突變有利于插 DNA 的穩定和高純度質粒 DNA 的提取。φ80dlacZ?M15 標記的存在使 DH10B 可用于藍白斑篩 選,rpsL 賦予其鏈霉素抗性。 DH10B 感受態細胞適用于大質粒的構建或者各種文庫構建,經特殊 工藝制作,pUC18 質粒檢測轉化效率>1010cfu/μg DNA。

C43(DE3)化轉表達感受態

存儲條件 -80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 質量控制 無外源質粒 DNA 殘留; 電轉法轉化效率≥1010 cfu/μg pUC18 DNA。 使用方法 1. 0.1cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘, 使乙醇充分揮發,待乙醇揮發干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯 蓋,冰中靜置 5 分鐘充分降溫。 2. -80℃保存的 DH10B 電擊感受態細胞插入冰中 5 分鐘,待其融化,加入目的 DNA (質?;蜻B接 產物)并用手撥.打 EP 管底輕輕混勻,避免產生氣泡,立即插入冰中。

A. 測定轉化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的對照質粒 pUC18;

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B. 對于連接產物,請用乙醇沉淀 DNA 后加入適量 TE 緩沖液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)懸,DNA 濃度不超過 100ng/μl,體積不超過 5μl/50μl 感受態。 3. 200 μl 槍頭將感受態-DNA 混合物快速移到電擊杯中,避免產生氣泡,蓋上杯蓋。 4. 啟動電轉儀,設置參數:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此為 BioRad 電轉儀推薦參數,也可按 所用電轉儀推薦的參數操作),將電擊杯快速放入電轉槽中,電擊完成快速插入冰中。 5. 2 分鐘后從冰中取出電擊杯,放室溫,加入 700 μl 不含抗生素的無菌 S.O.C. 培養基(室溫),用 1ml 槍吹吸電擊杯底部數次混勻后,轉移到 50ml 離心管(BD Falcon50ml 錐形離心管等),向離心 管中補加 S.O.C. 培養基至 5ml。37℃,225 rpm 復蘇 60 分鐘。



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