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CCK-8 試劑盒

CCK-8 試劑盒

簡要描述:Cell Counting Kit-8,簡稱 CCK-8 試劑盒, 是一種基于 WST-8 而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度、無放射性的比色檢測試劑盒。

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所屬分類:普通試劑

更新日期:2021-05-13

廠商性質:經銷商

詳情介紹
品牌自營品牌供貨周期現貨
應用領域生物產業
  1. 產品包裝

產品編號

名稱

規格

L0001

Cell Counting Kit-8

1 mL

L0002

Cell Counting Kit-8

5 mL

L0003

Cell Counting Kit-8

100 mL

L0004

Cell Counting Kit-8

1 L

  1. 產品概述

Cell Counting Kit-8,簡稱 CCK-8 試劑盒, 是一種基于 WST-8 而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度、無放射性的比色檢測試劑盒。CCK-8 溶液可以直接加入到細胞樣品中,不需要預配各種成分。WST-8 在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃 formazan (參考圖 1) 。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺 (生成 formazan  )  和細胞數目呈線性關系( 2) 。

 

WST-8 MTT 的一種升級替代產品,和MTT 或其它MTT 類似產品,如 XTT、MTS 等相比有明顯的優點:MTT 被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的 formazan 不是水溶性的, 需要有特定的溶劑來溶解, WST-8 XTT、MTS 產生的 formazan 是水溶性的,可以省去后續的溶解步驟;WST-8 產生的 formazan XTT MTS 生的 formazan 更易溶解;WST-8 XTT MTS 更加穩定,使實驗結果更可靠;WST-8 MTT、XTT 等相比線性范圍更寬, 靈敏度更高,并且更加穩定。 WST-8 對細

胞無明顯毒性。加入 CCK-8 溶液顯色后, 可以在不同時間反復 用酶標儀讀板,檢測時間更加靈活,便于確定最佳測定時間。

  1. 操作說明

本試劑盒可以用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測,也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測,或一些藥物誘導的細胞生長抑制檢測。

  1. 制作標準曲線
  1. 先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,然后接種細胞;
  2. 按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做 5-7 個細 胞濃度梯度,每組 4-6 個復孔;
  3. 接種后培養 2-4 小時使細胞貼壁,然后每 100 μL 培養基加 10 μL CCK-8 試劑培養一定時間后測定 OD 值,制作出一條以細胞數量為橫坐標,OD 值為縱坐標的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量。
  1. 細胞活性檢測
  1. 96 孔板中接種細胞懸液 (100 μL/ ) ,將培養板放在培養箱中預培養 24 小時;
  2. 向每孔加入 10 μL  CCK-8  溶液 (意不要產生氣泡) ;
  3. 將培養板置于培養箱內孵育 1-4 小時;
  4. 用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。
  1. 細胞增殖-毒性檢測
  1. 96 孔板中接種細胞懸液 (100 μL/ ) ,將培養板放在培養箱中預培養 24 小時;
  2. 向培養板加入不同濃度的待測藥物;
  3. 將培養板在培養箱孵育一段適當的時間;
  4. 向每孔加入 10 μL  CCK-8  溶液 (意不要產生氣泡);
  5. 將培養板置于培養箱內孵育 1-4 小時;
  6. 用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。
  1. 計算公式

細胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%

抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%

As: 實驗孔吸光度 (含細胞、培養基、CCK-8 溶液和藥物溶液) ;

Ac: 對照孔吸光度 (含細胞、培養基、CCK-8 溶液,


 

不含藥物) ;

Ab: 空白孔吸光度 (含培養基、CCK-8 溶液,不含細胞、藥物) 。

 

 

 

Cell line : HEK293

Medium : DMEM, 10% FBS

Incubation : 37°C, 5% CO 2, 2 hours

 

 
 

 

 

Cell line : U87, SK-HEP1 Medium : DMEM, 10% FBS

Chemicals : 200 μM Cisplatin (DDP)

Incubation : 37°C, 5% CO 2, 2 hours

注:如果待測藥物有氧化性或還原性,可在加入 CCK-8 之前更換新鮮培養基,去掉待測藥物的影響。當待測藥物影響比較小的情況下可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入待測藥物后的空白吸收即可。

  1. 保存條件

4°C 一年

-20°C 兩年

長期保存,建議避光

  1. 注意事項
  1. CCK-8 的培養時間一般為 1-4 小時,但在培養 30 分鐘左右即可取出肉眼 觀察顯色程度,根據細胞種類而定,需要摸索條件,

CCK-8 的最佳反應時間以具體顯色的最佳時間為準。

  1. 使用 96 孔板進行檢測時,如果細胞培養時間較長,一定要注意蒸發問題。一方面, 由于 96 孔板周圍一圈最容易蒸發,可以采取棄用周圍一圈的辦法, 改加相同量的PBS、水或培養液;另一方面,可以把 96 孔板置 于靠近培養箱內水源的地方,以緩解蒸發。
  2. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應,所以還原劑 (例如一些抗氧化劑) 會干擾檢測,如果待檢測體系中存在較多的還原劑,需設法去除。 用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡,否則會干擾測定。 4加入藥物中如含有金屬,對 CCK-8 顯色有影響。終濃度為 1 mM 的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制 5% 、15% 、90% 顯色反應,使靈敏度降 低。如果終濃度是10 mM 的話,將會 100% 抑制。
  1. 培養基中的酚紅不會影響實驗結果,酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。
  2. 本產品可以檢測,但不能檢測酵母細胞。向 100 μL 培養液中加入 10 μL CCK-8 溶液,并培養 1-4 小時或過夜。
  3. CCK-8 試劑對細胞的毒性非常低。它和活細胞內的脫氫酶持續反應使溶液顏色不斷加深,OD 值不斷增加 (: 活細胞內的脫氫酶是持續產生的) 。
  4. 要測定細胞的具體數量,建議同時做標準曲線。
  5. 建議采用多通道移液器,以減小平行孔間的差異。
  6. 以下方法可以終止 CCK-8  反應 (96 孔板)

a.在顯色反應后,將培養板放置 4°C 冰箱內。b.每孔加 10 μL 0.1 M HCl 溶液。(c).  每孔加 10 μL 1% (w/v)   SDS (十二烷基硫酸鈉) 溶液。

注意:反應停止后,應在 24 小時內測定。11本產品僅限于專業人員的科學研究用, 不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。

12)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。



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